DB15∕T 3684-2024 蓖麻组织培养技术规程(内蒙古自治区)
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5B9432740B1C408E8B7D9FD47F1202C7 |
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文件大小(MB)： |
0.21 |
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9 |
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文件格式： |
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日期： |
2024/10/20 |
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ICS,65.020.20 65.020.20,CCS,B 21 15,内蒙古自治区地方标准,DB15/T 3684—2024,蓖麻组织培养技术规程,Code of practice for tissue culture of Ricinus communis,2024-09-27发布,2024-10-27实施,内蒙古自治区市场监督管理局 发布,DB15/T 3684—2024,I,前言,本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草,本文件由内蒙古自治区农牧厅提出,本文件由内蒙古自治区农业标准化技术委员会（SAM/TC 20）归口,本文件起草单位：通辽市农牧科学研究所、内蒙古民族大学、淄博市农业科学研究院,本文件主要起草人：韩雯毓、黄凤兰、何智彪、贾娟霞、李国瑞、刘鹏、乔文杰、曹文强、刘鸽、莫徳乐吐、狄建军、罗蕊、杨云峰、曲毅鹏、周祎、王丹、张洪雨、崔凤娟、吕静波、黄前晶、邓志兰、刘涵淼、李雅剑、贾兴田、齐金全、张超、柳妍娣,DB15/T 3684—2024,1,蓖麻组织培养技术 蓖麻组织培养技术 蓖麻组织培养技术 规程,1 范围,本文件规定了蓖麻组织培养过程中环境、器具及培养基消毒灭菌、培养基配制、组织培养、炼苗移栽等技术要求,本文件适用于蓖麻组织培养苗制备,2 规范性引用文件,下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件,GB/T 603 化学试剂 试验方法中所用制剂及制品的制备,3 术语和定义,下列术语和定义适用于本文件,母液 mother liquor,按照培养基配方配制的高倍浓缩液,外植体 explant explant explant,用于植物组织培养中作为离体培养材料的器官或组织的片段,子叶节 cotyledon node,胚轴与子叶间的连接点，位于胚轴的顶端,4 环境、器具及培养基消毒灭菌 准备室与接种室消毒,工作前或结束后，使用臭氧紫外灯照射1 h。 培养室消毒,DB15/T 3684—2024,2,每10 d使用臭氧紫外灯照射消毒2 h。如组培苗感染，应采用甲醛10 mL/m3和高锰酸钾5 g/m3（2：1）混合薰蒸消毒，在密闭条件下熏蒸消毒20 min～30 min，消毒后要打开门窗通风换气。 超净工作台消毒灭菌,接种前臭氧紫外灯照射消毒20 min，并用75%酒精喷洒消毒台面；定期清洗超净工作台的过滤膜。 器具灭菌,玻璃器具（三角瓶、培养皿）、金属器具（镊子、手术刀）采用高温高压蒸汽灭菌锅进行灭菌处理，蒸气压力102.9 kPa(1.05 kg/cm2) ，温度121 ℃，时间20 min。 污染瓶消毒灭菌,有污染的培养容器用高温高压蒸汽灭菌锅进行灭菌，蒸气压力102.9 kPa(1.05 kg/cm2) ，温度121 ℃，时间60 min。灭菌后去除培养基，用流水洗净后存放。 培养基消毒灭菌,使用高温高压蒸汽灭菌锅灭菌，蒸气压力102.9 kPa(1.05 kg/cm2) ，温度121 ℃，时间20 min。植物激素ZT采用滤膜网孔直径0.45 μm以下的微孔过滤灭菌器进行过滤灭菌,5 培养基配制 基本培养基,预培养、不定芽诱导、生根培养采用1/8MS基本培养基。 母液、激素配制与保存,5.2.1 配制,将常用试剂配制成50～100倍的母液，按照GB/T 603规定方法配制。所用激素均配制浓度为1 mg/mL 的溶液，配制方法按照附录A的规定,5.2.2 保存,母液贴上标签，注明溶液名称、配制倍数、配制日期、配制者等信息，并于4 ℃条件下保存。贮藏时间在3个月之内，如有霉菌和沉淀产生，则不应使用。 无菌苗培养基配制,在700 mL蒸馏水中加入30 g蔗糖与5.7 g琼脂，蒸馏水定容至1 L。搅拌均匀后分装到100 mL的三角瓶中，每瓶分装50 mL。 预培养培养基配制,1/8MS+30 g/L蔗糖+7.5 g/L琼脂粉。搅拌均匀后分装到50 mL的三角瓶中，每瓶分装20 mL。 不定芽诱导培养基配制,1/8MS+8.0 mg/L ZT+30 g/L蔗糖+7.5 g/L琼脂粉。搅拌均匀后分装到50 mL的三角瓶中，每瓶分装20 mL,DB15/T 3684—2024,3,生根培养基配制,1/8MS+1.0 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+7.5 g/L琼脂粉。 pH值调节,除无菌苗培养基外，上述基本培养基均需使用0.1 mol/L的HCl或0.1 mol/L的NaOH调节pH至5.8。 贮存,标明培养基编号、种类、配制日期，在4 ℃ 条件下贮藏备用，贮存时间不应超过1个月,6 组织培养 接种,6.1.1 材料选择及灭菌处理,选择饱满的种子去壳后放入无菌的大烧杯中，在超净工作台中先用75%的酒精浸泡10 s～20 s，再用2%的次氯酸钠消毒20 min～30 min，消毒期间充分搅拌，最后用无菌水洗4～6次，用滤纸吸干种子表面的水分,6.1.2 培养方法,将处理后的蓖麻籽仁接种到无菌苗培养基上，每瓶接种18～22颗，培养6 d～8 d开始萌发。培养条件为温度25 ℃、光照强度2000 Lx、光照时间16 h/d。 外植体制备,在子叶未形成前，胚根和胚轴总长约为3 cm～5 cm时，切取子叶节并将其一分为二作为外植体，垂直插入预培养培养基上进行预培养。培养条件为温度25 ℃、光照强度2000 Lx、光照时间16 h/d。 不定芽诱导,将预培养7 d的子叶节转……
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